色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會(hui) 降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從(cong) 高處掉下都會(hui) 影響柱內(nei) 的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(hui) 衝(chong) 動柱內(nei) 填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。
2、應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從(cong) 有機溶劑改變為(wei) 全部是水，反之亦然。
3、一般說來色譜柱不能反衝(chong) ，隻有生產(chan) 者指明該柱可以反衝(chong) 時，才可以反衝(chong) 除去留在柱頭的雜質。否則反衝(chong) 會(hui) 迅速降低柱效。
4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前麵連接一預柱， 分析柱是鍵合矽膠時，預柱為(wei) 矽膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被矽膠"飽和"，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
5、經常用強溶劑衝(chong) 洗色譜柱，清除保留在柱內(nei) 的雜質。在進行清洗時，對流路係統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體(ti) 積應是柱體(ti) 積的20倍左右。下麵列舉(ju) 一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為(wei) 參考：
矽膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次衝(chong) 洗，然後再以相反順序依次衝(chong) 洗，所有溶劑都必須嚴(yan) 格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質，已烷使矽膠表麵重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次衝(chong) 洗，再以相反順序依次衝(chong) 洗。如果下一步分析用的流動相不含緩衝(chong) 液，那麽(me) 可以省略zui後用水衝(chong) 洗這一步。四氫呋喃與(yu) 乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞(ya) 碸數次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質汙染。陽離子交換柱可用稀酸緩衝(chong) 液衝(chong) 洗，陰離子交換柱可用稀堿緩衝(chong) 液衝(chong) 洗，除去交換性能強的鹽，然後用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表麵的有機物)、甲醇、水依次衝(chong) 洗。
6、保存色譜柱時應將柱內(nei) 充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發幹燥。禁止將緩衝(chong) 溶液留在柱內(nei) 靜置過夜或更長時間。
7、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內(nei) ，使柱頭被汙染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體(ti) 積增大。在後兩(liang) 種情況發生時，小心擰開柱接頭，用潔淨小鋼將柱頭填料取出1-2mm高度(注意把被汙染填料取淨)再把柱內(nei) 填料整平。然後用適當溶劑濕潤的固定相(與(yu) 柱內(nei) 相同)填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理後柱效能得到改善，但是很難恢複到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與(yu) 分析柱相同固定相的短柱(5-30mm)，可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會(hui) 損失一定的柱效，這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以矽膠為(wei) 基質的填料，隻能在pH2-9範圍內(nei) 使用。柱子使用一段時間後，可能有一些吸附作用強的物質保留於(yu) 柱頂，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。
8、新的色譜柱在使用一段時間後柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢複。每次工作完後，用洗脫能力強的洗脫液衝(chong) 洗，例如ODS柱宜用甲醇衝(chong) 洗至基線平衡。當采用鹽緩衝(chong) 溶液作流動相時，使用完後應用無鹽流動相衝(chong) 洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(hui) 腐蝕不鏽鋼管道，不宜長期與(yu) 之接觸。裝在HPLC儀(yi) 上柱子如不經常使用，應每隔4-5天開機衝(chong) 洗15分鍾。
