液相色譜儀(yi) 由高壓液體(ti) 泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guan) 鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數據的必經之路。
一、液相色譜柱的安裝：
1、液相色譜柱的結構：
a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
柱接頭采用低死體(ti) 積結構，柱接頭是兩(liang) 端螺紋組件，一端是為(wei) 7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nei) 螺紋(國內(nei) 外已規範化)。7／16英寸外螺紋與(yu) 1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用於(yu) 密封。3／16英寸的內(nei) 螺紋與(yu) 1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環用於(yu) 柱接頭的密封。為(wei) 了盡量減少柱外死體(ti) 積，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環後要盡量插到底，然後再擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘擠壓變形後緊箍在連接管上(連接管通過壓環後露出的管長度應嚴(yan) 格控製在2．5mm長或其他固定尺寸)。
在兩(liang) 端柱接頭內(nei) ，柱管兩(liang) 端各放置一片不鏽鋼濾片(或濾網)，用於(yu) 封堵柱填料不被流動相衝(chong) 出柱外而流失。空柱各組件均為(wei) 316#不鏽鋼材質，能耐受一般的溶劑作用。但由於(yu) 含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nei) 不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
b、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與(yu) 流動相之間進行的，柱子的分類是依據填料類型而定。
正相柱：多以矽膠為(wei) 柱填料。根據外型可分為(wei) 無定型和球型兩(liang) 種，其顆粒直徑在3—10 ?m的範圍內(nei) 。另一類正相填料是矽膠表麵鍵合—CN，-NH2等官能團即所謂的鍵合相矽膠。
反相柱：主要是以矽膠為(wei) 基質，在其表麵鍵合十八烷基官能團(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10 ?m之間。
2，色譜柱的安裝：
a、拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nei) 貯存的溶劑。
b、擰下柱兩(liang) 端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、 按柱管上標示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與(yu) 進樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護柱)；柱的出口與(yu) 檢測器連接。連接管是外徑為(wei) 1.57mm、內(nei) 徑為(wei) 0.1-0.3mm的不鏽鋼管。連接管的兩(liang) 端均有空心螺釘及密封用壓環。在接管時一定要設法降低柱外死體(ti) 積。連接管通過空心螺釘、壓環後盡量用力插到底，然後順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為(wei) 止，再用扳手繼續順時針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓後有漏液現象，請用扳手繼續順時針擰1／4圈，直至不漏液為(wei) 止。
二、液相色譜柱的使用：
色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，並將結果保存起來，作為(wei) 今後評價(jia) 柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由於(yu) 所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件)，隻有這樣，測得的結果才有可比性。
1、樣品的前處理：
a、使用流動相溶解樣品。
b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與(yu) 柱填料產(chan) 生不可逆吸附的雜質。
c、使用0.45?m的過濾膜過濾除去微粒雜質。
2、流動相的配製：
液相色譜是樣品組分在柱填料與(yu) 流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(hui) 沉澱在柱中(或長時間保留在柱中)。
b、流動相具有一定惰性，與(yu) 樣品不產(chan) 生化學反應(特殊情況除外)。
c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體(ti) 泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
d、流動相的物化性質要與(yu) 使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配製。
e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chan) 生氣泡，導致實驗無法進行。
f、在流動相配製好後，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體(ti) 既有利於(yu) 檢測，還可以防止流動相中的微量氧與(yu) 樣品發生作用。
3、流動相流速的選擇：
因柱效是柱中流動相線性流速的函數，使用不同的流速可得到不同的柱效。對於(yu) 一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對內(nei) 徑為(wei) 4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對於(yu) 內(nei) 徑為(wei) 4.0mm柱，流速0.8ml／min為(wei) 佳。
當選用*流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
